訂購(gòu)信息：

產(chǎn)品說(shuō)明：

使用說(shuō)明：

溫馨提示：

1）細(xì)胞對(duì)腐草霉素的敏感性受pH值影響，如pH值越高，敏感性越高；另外，對(duì)于高滲透壓培養(yǎng)基如原生質(zhì)體再生用的培養(yǎng)基，腐草霉素的活性會(huì)明顯降低2-3倍。因此也可能通過(guò)使用低鹽培養(yǎng)基來(lái)降低腐草霉素使用量。

2）使用前，需將低溫存放的腐草霉素置于室溫回溫，之后低速充分混勻。

操作步驟

1. 大腸桿菌

攜帶bleomycin抗性基因如Sh ble，Tn5的質(zhì)粒，一旦轉(zhuǎn)化進(jìn)入大腸桿菌受體菌如HB101，DH5a，MC1061，賦予其腐草霉素抗性。

腐草霉素抗性的轉(zhuǎn)化子可以在添加5 μg/mL Phleomycin的低鹽LB瓊脂培養(yǎng)基（Yeast extract 5 g/L，Tryptone 10 g/L，NaCl 5 g/L，Agar 15 g/L，pH 7.5）中進(jìn)行篩選。加有腐草霉素的平板可于4℃穩(wěn)定保存1個(gè)月。

2. 酵母菌

釀酒酵母的腐草霉素抗性轉(zhuǎn)化子可在添加10 μg/mL Phleomycin的YEPD培養(yǎng)基中進(jìn)行篩選。

實(shí)驗(yàn)步驟：按常規(guī)方法進(jìn)行酵母細(xì)胞轉(zhuǎn)化，一旦DNA進(jìn)入細(xì)胞后，用YEPD培養(yǎng)基稀釋細(xì)胞并置于搖床上培養(yǎng)6 h或過(guò)夜，使其抗性性狀得以表達(dá)。之后將細(xì)胞冰浴1 h并涂布培養(yǎng)在添加10 μg/mL Phleomycin的YEPD（pH 7.0）固體培養(yǎng)基上。

3. 真菌

根據(jù)轉(zhuǎn)化子對(duì)Phleomycin 的敏感性不同，在添加有10-50 μg/mL腐草霉素的再生培養(yǎng)基內(nèi)進(jìn)行篩選。先將細(xì)胞在4℃孵育過(guò)夜然后置于生長(zhǎng)溫度培養(yǎng)，可提高其對(duì)抗生素的敏感性。

4. 植物細(xì)胞

根據(jù)植物類(lèi)型不同，選擇5-25 μg/mL Phleomycin進(jìn)行轉(zhuǎn)化子篩選。

5. 哺乳動(dòng)物細(xì)胞

5-50 μg/mL Phleomycin，推薦先通過(guò)建立滅殺曲線來(lái)確定最佳濃度。與G418做比較，可能需要更長(zhǎng)的時(shí)間來(lái)殺死細(xì)胞或者使細(xì)胞從平板上脫落，尤其當(dāng)細(xì)胞處于高密度的情況。

依細(xì)胞系不同，通常需要5~21天來(lái)挑選具腐草霉素抗性的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞。

注意事項(xiàng)：

1. 腐草霉素對(duì)濃酸較為敏感，但可短時(shí)間暴露于稀酸中。使用前將本品回溫至室溫，并輕輕混勻。

2. 腐草霉素有毒，避免直接接觸皮膚，不可吞服。酸性或堿性pH，或次磷酸鈉中會(huì)即刻失效。

3. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

本產(chǎn)品僅供科研使用，不可用于臨床診斷應(yīng)用或其他用途。