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參數(shù)說明：

使用說明：

1、用途及使用方法

1）用途：IPTG是β–半乳糖苷酶的活性誘導(dǎo)物質(zhì)?；谶@個(gè)特性，當(dāng)pUC系列的載體DNA（或其他帶有lacZ 基因載體DNA）以lacZ 缺失細(xì)胞為宿主進(jìn)行轉(zhuǎn)化時(shí)、或用M13噬菌體的載體DNA進(jìn)行轉(zhuǎn)染時(shí)，如果在平板培養(yǎng)基中加入X–gal和IPTG，由于β–半乳糖苷酶的α–互補(bǔ)性，可以根據(jù)是否呈現(xiàn)白色菌落（或噬菌斑）而方便地挑選出基因重組體。此外，它還可以作為具有lac或tac等啟動(dòng)子的表達(dá)載體的表達(dá)誘導(dǎo)物使用。

2）使用方法：首先把IPTG配制成23.83 mg/ml（100 mM）的水溶液，并進(jìn)行過濾除菌后保存。然后在100 ml的瓊脂培養(yǎng)基中，加入100 μl的上述溶液、200 μl的X-Gal（20 mg/ml的二甲基甲酰胺（DMF）溶液）和100 μl的Amp（100 mg/ml），制作成IPTG、X-Gal、Amp平板培養(yǎng)基。

當(dāng)DNA片段插入至pUC系列載體（或其他帶有l(wèi)acZ、Amp基因載體），然后轉(zhuǎn)化至lacZ缺失細(xì)胞中后，涂布上述的IPTG、X–Gal、Amp平板培養(yǎng)基，可根據(jù)長出菌體的藍(lán)白色，而方便地挑選出基因重組體（白色為具有DNA插入片段的基因重組體）。

2 、儲(chǔ)存液配制

1）稱取2.383 g IPTG；加入10 mL去離子水充分溶解IPTG粉末，配制1 M的儲(chǔ)存液；

2）用5-10 mL去離子水潤濕0.22 μm針孔過濾；

3）0.22 μm濾膜除菌上述IPTG溶液。分裝成1 mL，-20℃凍存，有效期可達(dá)1年。

3、藍(lán)白斑篩選

1. X-Gal、IPTG 加入瓊脂培養(yǎng)基溶液

1）高壓滅菌已加瓊脂的培養(yǎng)基，并冷卻到50℃左右。

2）每毫升培養(yǎng)基內(nèi)加入10 μL 20 mg/mL X-gal 溶液、10 μL 0.1 M的IPTG（使其終濃度達(dá)到1 mM）；

3）加入適量抗生素；

4）混勻后按照平板大小倒入適量培養(yǎng)基，待培養(yǎng)基冷卻至室溫后，接種細(xì)菌于37℃過夜培養(yǎng)。

2. X-Gal、IPTG加到瓊脂平板表面

1）于無菌超凈工作臺(tái)制備平板（如LB 瓊脂板）；

2）取40 μL 100 mM IPTG和120 μL 20 mg/mL X-gal混合，均勻地涂布于準(zhǔn)備好的平板上；
    注：平板邊緣較難充分涂布均勻，容易產(chǎn)生假陽性，因此，為了得到更好結(jié)果，建議后續(xù)操作中盡可能在平板中間挑取單克隆。

3）37℃孵育直至所有液體被吸收（30 min或更長）。接種細(xì)菌于37℃過夜培養(yǎng)。

4、誘導(dǎo)原理：

首先：E.coli的乳糖操縱子（元）含Z、Y及A三個(gè)結(jié)構(gòu)基因，分別編碼半乳糖苷酶、滲透酶和乙酰基轉(zhuǎn)移酶，此外還有一個(gè)操縱序列O、一個(gè)啟動(dòng)序列P及一個(gè)調(diào)節(jié) 基因I。I基因編碼一種阻遏蛋白，后者與O序列結(jié)合，使操縱子（元）受阻遏而處于關(guān)閉狀態(tài)。在啟動(dòng)序列P上游還有一個(gè)分解（代謝）物基因激 活蛋白（CAP）結(jié)合位點(diǎn)。由P序列、O序列和CAP結(jié)合位點(diǎn)共同構(gòu)成lac操縱子的調(diào)控區(qū)，三個(gè)酶的編碼基因即由同一調(diào)控區(qū)調(diào)節(jié)，實(shí)現(xiàn)基因產(chǎn)物的協(xié)調(diào)表達(dá) 。

其次：在沒有乳糖存在時(shí)，lac操縱子（元）處于阻遏狀態(tài)。此時(shí)，I序列在PI啟動(dòng)序列操縱下表達(dá)的Lac阻遏蛋白與O序列結(jié)合，阻礙RNA聚合酶與P序列結(jié)合，抑制轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)。當(dāng)有乳糖存在時(shí)，lac操縱子（元）即可被誘導(dǎo)。在這個(gè)操縱子（元）體系中，真正的誘導(dǎo)劑并非乳糖本身。乳糖進(jìn)入細(xì)胞，經(jīng)β-半乳糖苷酶催化，轉(zhuǎn)變?yōu)楫惾樘?。后者作為一種誘導(dǎo)劑分子結(jié)合阻遏蛋白，使蛋白構(gòu)象變化，導(dǎo)致阻遏蛋白與O序列解離、發(fā)生轉(zhuǎn)錄。異丙基硫代半乳糖苷（IPTG）的作用與異乳糖相同，是一 種作用極強(qiáng)的誘導(dǎo)劑，不被細(xì)菌代謝而十分穩(wěn)定，因此被實(shí)驗(yàn)室廣泛應(yīng)用。

注意事項(xiàng)：

1）運(yùn)輸：冰袋運(yùn)輸

2）保存：-20℃保存，有效期5年。

本產(chǎn)品僅供科研使用，不可用于臨床診斷應(yīng)用或其他用途。