訂購信息：

產(chǎn)品說明：

使用說明

基本介紹：

10-Acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine (ADHP),中文名10-乙?；?,7-羥基吩嗦，以商標(biāo)名Amplex⑧Red在市場上銷售。ADHP是一種高度靈敏和穩(wěn)定的過氧化物酶底物，選擇性檢測過氧化氫(H2O2)。存在辣根過氧化物酶(HRP)的體系中，這一基本無色和非熒光的ADHP與H2O2以1: 1的化學(xué)定量比反應(yīng)，生成強(qiáng)紅色熒光的試鹵靈(Resorufin) (Ex/Em= 571/585nm)，可通過熒光光度計和酶標(biāo)儀分析結(jié)果。許多酶反應(yīng)能產(chǎn)生H2O2,因此，ADHP能夠用在偶聯(lián)酶促反應(yīng)中檢測許多不同酶的生物活性。

工作原理：

使用ADHP進(jìn)行偶聯(lián)酶促反應(yīng)的工作原理。萄萄糖氧化酶催化萄萄糖氧化生成過氧化氫(H2O2) , 通過辣根過氧化物酶(HRP) 催化ADHP反應(yīng)生成強(qiáng)熒光試鹵靈(Resorufin)。

產(chǎn)品應(yīng)用：10-Acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine (ADHP)是目前為止非常靈敏和穩(wěn)定的熒光探針用來檢測HRP和H2O2。

A)  ADHP普遍用來檢測許多免疫實(shí)驗中的HRP;

B)  ADHP用來檢測微量的H2O2;

ADHP的應(yīng)用實(shí)例:

      文獻(xiàn)來源: Summers FA et al. Photooxidation of Amplex Red to resorufin: implications of exposing the Amplex Red assay to light. Methods Enzymol.2013;526:1-17.

實(shí)驗1) Amplex Red Assay

      Reactions containing 50 μM Amplex Red reagent, 0.1 U/mL HRP, H2O2 and 0.5 U/mL catalase in 50 mM sodium phosphate buffer, pH 7.4, as indicatedin the figure legends, were prepared in a darkroom under a red light. White ELISA plates containing the samples (100 uL/wel) in triplicate were eitherkept in the dark for 30 and 60 min or under ambient laboratory light. The fluorescence (excitation 535 nm, emission 595 nm) was measured on a GENiosplatereader (Tecan, Durham, NC, USA).

實(shí)驗2) Cell Culture Assay

      HaCaT keratinocytes were incubated with 50 μM Amplex Red in PBS for 1 h at 37°C in the dark, then cells were iradiated using UVA (315- 400 nm) fromfour fluorescent PUVA lamps (Houvalite F20T12BL-HO; National Biological Co, Twinsburg, OH) for 15 minutes (3.75 J/cm2) and 30 minutes (7.5 J/cm2).Control cells were treated with the same conditions. After exposure, the fluorescence (excitation 535 nm, emission 595 nm) was recorded using a platereader.

注意事項：

1）ADHP的使用比較方便, 可配制10-20mM DMSO儲存液，之后用反應(yīng)緩中液比如PBS, Tris buffer稀釋到50-200μM工作濃度用于檢測。最佳的工作濃度需根據(jù)自身實(shí)驗需求進(jìn)行優(yōu)化。

2) Amplex⑧Red是 Life Technologies公司的注冊商標(biāo)名。

3) 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并載一次性手套操作。

本產(chǎn)品僅供科研使用，不可用于臨床診斷應(yīng)用或其他用途。