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產(chǎn)品描述

7-羥基香豆素-3-羧酸琥珀酰亞胺酯(7-Hydroxycoumarin-3-carboxylic acid, succinimidyl ester) 是7羥基香豆素3-羧酸(7-OHCCA) 的胺反應(yīng)琥珀酰亞胺酯，是用來標記蛋白和核酸的一種藍色熒光染料。這一香豆素的衍生物也越來越多的被用來標記多肽、核苷酸和碳水化合物。

NHS酯標記氨基生物分子的通用步驟，僅作參考：

1. 計算NHS酯的所需量;

2. 確定反應(yīng)體系的體積;

3. 用DMSO或DMF溶解NHS酯。

[注意:低溫保存的NHS酯一定要提前取出回至室溫，低速離心后，再開蓋使用。NHS酯固體-定要用高質(zhì)量的無水有機溶劑溶解，配制成合適濃度母液，盡量現(xiàn)配現(xiàn)用，或根據(jù)單次用量分裝，置于-20°C干燥凍存， 避免反復(fù)凍融。]

4.  用pH 8.3-8.5的緩沖液溶解生物分子。

1) 可用0.1M NaHCO3或0.1M磷酸緩沖液。注意pH是最重要的事。且避免緩沖液內(nèi)含胺類物質(zhì)，比如Tris, 甘氨酸，銨離子,或穩(wěn)定蛋白比如BSA。如果緩沖液內(nèi)含胺類物質(zhì)，可先透析到10-20mM PBS。然后按照1ml生物分子溶液加0.1ml 1M NaHCO得到理想的pH。低濃度疊氮鈉(<3 mM)或柳柳汞(<1 mM)不會干擾標記反應(yīng)。

2）當進入大規(guī)模標記(幾百mg級別的NHS酯) , 注意由于NHS酯的水解隨著時間推移，反應(yīng)混合物容易發(fā)生酸化。監(jiān)測pH,或之后使用更高濃度的緩沖液。

5. 加NHS酯溶液到生物分子溶液內(nèi)，輕輕渦旋混勻。冰上過夜或室溫至少標記4h。

6. 使用合適方法比如凝膠過濾 (大分子最常用方法)來純化標記物。沉淀和色諾是其他可選的替代方法。有機雜質(zhì)(比如N-羥基琥珀酰亞胺，NHS酯,水解過程產(chǎn)生的酸)絕大部分都很容易被分離。對于蛋白和核酸，可用乙醇或丙酮沉淀法。

7. 純化好的標記分子最好保存于未標記分子的相同溶劑中。為了防止標記分子變性,或延長保存周期，可添加BSA或其他穩(wěn)定劑。

注意事項：

1. 熒光探針都存在淬滅現(xiàn)象，在保存和使用的過程中都要注意避光

2. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作

本產(chǎn)品僅供科研使用，不可用于臨床診斷應(yīng)用或其他用途。