貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
X12554-200ul | Streptavidin (5mg/ml) 鏈霉親和素(5mg/ml) | 200ul |
X12554-1ml | Streptavidin (5mg/ml) 鏈霉親和素(5mg/ml) | 1ml |
X12554-2ml | Streptavidin (5mg/ml) 鏈霉親和素(5mg/ml) | 2ml |
基本信息:
英文名:Streptavidin
別名:鏈酶親和素;鏈霉抗生物素蛋白;鏈霉親和素
CAS號:9013-20-1
介紹:鏈親和素(SA)是阿維丁鏈霉菌(Streptomyces avidinii)表達(dá)的一種小分子蛋白。本制品為127AA最佳核心結(jié)構(gòu),每分子SA結(jié)合4個(gè)生物素分子,國際比活性12~15U/mg。SA與禽類親和素(Avidin,AV)相比特異性更強(qiáng),與生物素結(jié)合后半衰期長達(dá)6h,而AV半衰期僅為1h。由于SA不含糖基且等電點(diǎn)接近中性,因此SA在檢測應(yīng)用中具有比AV更低的非特異性背景。
用途:本制品已廣泛應(yīng)用于制備SA-偶聯(lián)酶制劑(如SA-HRP,SA-AP等),SA-偶聯(lián)熒光素(即熒光染料,如SA-FITC,SA-Cy2,SA-Cy3等)、SA-偶聯(lián)磁珠等,進(jìn)而參與酶聯(lián)免疫吸附檢測(ELISA)、免疫組化、親和色譜填料、含StrepTagII標(biāo)簽(8-AA寡肽)的蛋白純化、生物傳感器、生物納米微球、預(yù)靶向制藥研究、生物芯片被料等生物技術(shù)領(lǐng)域。
優(yōu)點(diǎn):高親和力,高偶聯(lián)效率。
注意事項(xiàng):
1.凍干粉溶解后應(yīng)避免反復(fù)凍融,建議分裝成小包裝后分別凍存。
2.凍干粉中含20mMNa2CO3 pH9.5的緩沖體系,若用于包被,酶標(biāo)可以直接使用。若用于膠體金,最好調(diào)節(jié)pH或透析后使用。溶解后立即使用效果最好,不能4℃長期存放。
3.若用于ELISA包板,膠體金烘金,硝酸纖維素膜上用SA劃線后需要烘干保存,包被液或緩沖液中需加入20%蔗糖作為活性保護(hù)劑。
【操作步驟簡述】
一、微孔板包被
1、用碳酸鈉緩沖溶液(pH 9.6)溶解凍干粉,將濃度稀釋成3-10ug/ml(客戶可設(shè)定梯度進(jìn)行實(shí)驗(yàn))
注意:由于SA等電點(diǎn)是7.4,包被不建議使用中性緩沖液
2、用移液器吸取100ul/孔,4℃過夜包被或者37℃包被2h;
3、洗滌:倒盡板孔中液體,加200ul洗滌液,靜放三分鐘,反復(fù)三次,最后將反應(yīng)板倒置在吸水紙上,使孔中洗滌液流盡,扣干
4、后續(xù)進(jìn)入封閉、洗滌、抗原抗體結(jié)合流程
若不立即進(jìn)入下游實(shí)驗(yàn),包被板需要進(jìn)行烘干保存時(shí)。包被前,將包被液中加入20%蔗糖作為活性保護(hù)劑。
二、SA偶聯(lián)磁珠
2.1 NHS 活化
1、充分混勻磁珠后,取100μl PangoBeads COOH 磁珠到1.5 ml 離心管中,置于磁性分離上,待固液分離后去除上清液;
2、取200μl MES溶液(25mM,pH 5.0)加入到離心管中,置于磁性分離上,待固液分離后去除上清液。重復(fù)該步驟1 次; **3、迅速加入新配制的50μl EDC 溶液和50μl NHS 溶液 (均為50mg/ml, 以上述MES 配制)到裝有磁珠的離心管中,漩渦混勻使磁珠充分懸浮,室溫下垂直混合30min; **4、反應(yīng)結(jié)束后,加入100μl 上述 MES 溶液洗滌 2 次;(活化狀態(tài)不宜長時(shí)間保存, 建議立即進(jìn)行偶聯(lián))
2.2 蛋白偶聯(lián)
1、將離心管置于磁性上,分離去除上清液,加入100μl蛋白溶液(25 mM MES,pH 5.0) 輕柔地混勻;(蛋白濃度在0.1-2.0mg/ml)
2、在室溫下垂直混合反應(yīng)2h,或在4℃條件下垂直混合過夜;
3、反應(yīng)結(jié)束后將離心管置于磁分離架上,磁性分離去除上清液,加入1ml乙醇胺溶液 (3M,pH9.0)洗滌磁珠 2 次;
4、加1ml乙醇胺溶液(3M, pH 9.0)于離心管中,渦旋30s,將離心管置于垂直混合 儀中室溫反應(yīng)1-2h;
5、反應(yīng)結(jié)束后,將離心管置于磁力架上,待固液分離后移除上清液,然后加入100μl 純化水輕柔渦旋 30s,磁吸分離,重復(fù)該步驟 1 次;
6、加入適量的保存液(可根據(jù)需要來確定保存溶液的加入量,以調(diào)整偶聯(lián)配體磁珠的加入適量的保存液(可根據(jù)需要來確定保存溶液的加入量,以調(diào)整偶聯(lián)配體磁珠的濃度)保存于4°,如果固定的生物配體穩(wěn)定,可以在保存溶液中加入0.02%(W/V)疊氮化鈉作為抑菌劑。
外觀: 凍干粉
敏感性: 對熱敏感,易吸潮
儲存條件: -20℃